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Immunophenotyping by Flow Cytometry

면역 상태는 질병 상태, 치료 효율성 및 백신과 같은 외부 자극에 대한 반응과 관련이 있습니다. 면역 표현형 분석으로 후보 세포 유형, 하위 등급 및 기능을 신속하게 식별할 수 있습니다. 면역 세포는 백신의 면역원성과 그 효율성에 영향을 미칠 수 있으므로 다양한 면역 세포 집단의 빈도와 단핵구, NK 세포, T와 B 세포 같은 특정 세포 하위 집합의 분화 및 활성화 상태를 모니터링하는 것이 필수적입니다. NovoCyte 유세포 분석기는 여러 백혈구를 동시에 정량할 수 있어 환자의 면역 상태를 보다 잘 이해하고 전염성 질환에 대한 면역 반응을 감시할 수 있습니다.


Flow cytometry is a powerful tool for analyzing highly heterogeneous cells, such as immune cells in blood, to identify cell populations of interest. During the adaptive immune response, T cells are activated to rapidly divide and destroy infected or cancerous cells The detection of T cell inhibitory receptors has become a focus of cancer immunotherapy research, since reversing inhibitory receptor expression through checkpoint inhibitor blockade has been shown to restore T cell function and improve tumor immunity. However, the analysis of T cell inhibitory receptor expression alone does not provide a complete view of T cell state. Measuring additional markers for T cell differentiation, activation, previous antigen exposure, degranulation, and cytokine production provides a more comprehensive understanding.

While significant advances in flow cytometry instrumentation and reagents have made complex multicolor immunophenotyping experiments easier to perform, the variety of markers that can be analyzed can be limited to the number of available fluorescent channels on the instrument. Additionally, high-performance flow cytometers often require an extensive amount of experience to deliver high-quality results.

Agilent NovoCyte Flow Cytometers are designed to meet the needs of the most demanding scientists while still being accessible to novice users. Easily generate comprehensive immunophenotyping data with a line of flow cytometers that provides:

  • Reproducible results at varying flow rates with accurate absolute cell counts, rendering reference beads unnecessary

  • Integration into different laboratory automation platforms for high-throughput processing of FACS tubes (using a 40-tube rack) and 24-, 48-, 96-, and 384-well plates

  • High sensitivity and excellent scatter resolution to detect small particles

  • Intuitive instrument operation and powerful software, with easy maintenance and automatic cleaning cycles

  • Flexibility to choose from up to 30 fluorescence channels, utilizing up to 5 lasers



A Powerful Yet Affordable Flow Cytometer for Immunophenotyping

NovoCyte


유세포 분석기는 신뢰할 수 있는 Agilent 품질로 제작되었으며 신뢰할 수 있는 성능을 제공하는 검증된 이력을 보유하고 있습니다. 고급 유체 설계 기능은 귀하가 필요로 하는 재현성을 제공하는 동시에 예약 및 자동 시작 및 종료, 자동 세척 주기, 배치 분석 및 보고 기능을 제공합니다. 빠르고 견고한 자동 시료 주입기를 사용하여 실험실을 떠난 후에도 유세포 분석기가 작업을 수행하고 시료를 수집하도록 합니다. 수동 유지보수 또는 검출기 설정을 정기적으로 조정해야 하는 번거로움을 해소합니다.

 

Identification of immune cells in peripheral human blood

이 24색 유세포 분석기 패널에서, 면역 세포는 표면 수용체의 발현에 의해 규명됩니다. 과립구 및 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 SSC 및 CD45 발현에 의해 식별됩니다. 과립구 하위 집합은 CD16이 호중구(CD16+) 또는 호산구(CD16-)로 발현함으로써 구분됩니다. PBMC 모집단에서 CD14 발현은 단핵 세포(CD14+SSChi)에서 림프구(CD14-SSClo)를 식별하는 데 사용됩니다. 림프구 집단은 추가로 분리됩니다.



In-Depth Analysis of T Cell State by Flow Cytometry


T 세포 분화 및 활성화에 대한 자세한 정보를 얻고, 유세포 분석법으로 TCR 활성화에 대한 T 세포의 반응을 측정하세요. 이 예시에서는 항CD3, 항CD28 항체, interleukin-2(IL-2)로 자극된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분석하여 PerCP-Cy5.5 및 BV570 형광 색소를 사용하여 CD4 및 CD8 T 세포의 빈도를 측정합니다. T 세포 분화는 또한 NovoCyte 유세포 분석으로 CD45RA 및 CCR7의 표면 발현을 기반으로 T 세포 subset의 상대적 빈도를 측정합니다.



Determine Inhibitory Receptor Expression for Specific T Cell Subsets



T 세포의 억제 수용체 및 활성화 마커 발현 수준의 측정은 T 세포 효과 기능의 면역 치료 효과 연구에 필수적입니다. 또한, T 세포 탈진의 정도는 다양한 억제 수용체의 동시 발현과 깊은 상관관계가 있습니다. NovoCyte 유세포 분석기를 사용하여 단일 워크플로에서 CD25, CD127의 발현, PD-1, LAG-3, TIM-3의 탈진, IL-2, TNF-α, IFN-α의 사이토카인 분비, CD4+, CD8+ T 세포 하위 집합 내의 CD107α의 탈과립화 수준을 쉽게 측정할 수 있습니다.

 


Measure Inhibitory and Activation Receptors over Time



With persistent stimulation, inhibitory receptor expression increases and is a key indicator of T cell  exhaustion. Defining how inhibitory receptors are upregulated during acute and persistent T cell stimulation is essential for the development of safer and more effective therapeutic manipulations of these pathways. In this example, the NovoCyte flow cytometer is used to examine activation markers (CD25 and CD127) and inhibitory receptors (PD-1, LAG3, and TIM-3) on days zero, two, and four and after restimulation on day five.

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